技術(shù)文章
Technical articles產(chǎn)品簡介:
脂質(zhì)(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有機溶劑(如乙醇等)。人體的脂肪主要有兩種:1、儲存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、腎、胰腺等部位;2、結(jié)構(gòu)脂肪,如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等),主要分布于細(xì)胞內(nèi)。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類,呈中性。中性脂肪染色經(jīng)常采用蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹黑B、油紅O法等,傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料,最近發(fā)現(xiàn)偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色,油紅O是很強的脂溶劑和染脂劑, 較易與甘油三脂結(jié)合呈小脂滴狀,與磷脂結(jié)合力稍差,其染色原理一般認(rèn)為是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。
油紅O染色液(培養(yǎng)細(xì)胞專用)主要用于顯示人工培養(yǎng)細(xì)胞的脂肪變性和類脂質(zhì)的異常沉著,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多數(shù)中性脂肪滴,鑒別培養(yǎng)細(xì)胞中所發(fā)生的變化及其性質(zhì),標(biāo)本不采用含有乙醇的固定液,脂肪的陽性染色結(jié)果呈橘黃至紅色,但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定。 該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
名稱 | 規(guī)格一 4×20ml | 規(guī)格二 4×50ml | Storage | |
試劑(A): Cell ORO Fixative | 50ml | 100ml | RT | |
試 劑 (B): ORO Stain | B1: ORO Stain A | 12ml | 30ml | RT |
B2: ORO Stain B | 8ml | 20ml | 4℃ | |
按 B1:B2=3:2 比例混合靜置, 即為 ORO Stain,可靜置 20~40min 或3000rpm 離心 10 分鐘,取上清備用。 | ||||
試劑(C): Mayer 蘇木素染色液 | 20ml | 50ml | RT | |
試劑(D): ORO Buffer | 20ml | 50ml | RT | |
使用說明書 | 1 份 |
自備材料:
1、60%異丙醇、蒸餾水、PBS 緩沖液或生理鹽水
操作步驟(僅供參考):
1、 培養(yǎng)好的細(xì)胞樣品固定于 Cell ORO Fixative 15~25min。
2、 PBS緩沖液或生理鹽水稍沖洗,稍晾干。
3、 60%異丙醇滴洗 20~30s。
4、 滴加油紅O染色液密閉染色10~15min。
5、 60%異丙醇稍洗以便去除染液,PBS緩沖液或生理鹽水稍沖洗。
6、 Mayer 蘇木素染色液復(fù)染核2~5min。
7、 (可選)ORO Buffer 1min。
8、 蒸餾水漂洗 8~10min。
9、 晾干,鏡檢。
染色結(jié)果:
中性脂肪 | 橙紅色或橘紅色 |
細(xì)胞核 | 藍(lán)色 |
注意事項:
1、ORO 染色液不夠穩(wěn)定,易產(chǎn)生沉淀,不宜提前配制,可按需配制后采用靜置20~40min 或 3000rpm 離心10 分鐘,取上清備用。
2、Mayer蘇木素染色液復(fù)染時間不能過長。
3、染色結(jié)果不能長期保存,應(yīng)盡快觀察及照相。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5、試劑開封后請盡快使用,以防影響后續(xù)實驗效果。
有效期:12個月有效;常溫運輸,按要求保存。